中国生物制品学杂志

2013, v.26(09) 1328-1333

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荧光定量PCR与焦磷酸测序联合应用检测异烟肼、利福平耐药性结核分枝杆菌
Test for isoniazid- and rifampicin-resistant Mycobacterium tuberculosis by fluorescent quantitative PCR and pyrosequencing technology

程弘夏;柳建银;周立;王业富;唐景峰;

摘要(Abstract):

目的联合运用荧光定量PCR和焦磷酸测序技术快速检测异烟肼、利福平耐药性结核分枝杆菌。方法收集结核病疑似患者痰液样本,提取样本总DNA,运用Taqman荧光定量PCR对结核分枝杆菌的感染进行快速筛查。对检测结果为阳性的样本,采用焦磷酸测序法分别对异烟肼、利福平耐药结核分枝杆菌相关基因katG、rpoB的突变热点进行测序分析,与标准菌株序列比对,判断结核分支杆菌异烟肼、利福平的药敏性。采取Bactec 960药敏法鉴定结核分枝杆菌耐药性,并与焦磷酸测序法药敏检测结果进行比较,评估焦磷酸测序法的可靠性。结果荧光定量PCR技术检测痰液样本结核分枝杆菌的准确率达98.95%,检测时间约3 h;以Bactec 960药敏法鉴定结果为标准,焦磷酸测序法对结核分枝杆菌异烟肼、利福平的药敏鉴定结果准确性分别达93.75%和96.15%,其中,对耐药菌株判断,两种方法的一致性高达98%。结论采用荧光定量PCR检测技术可快速、准确地进行结核分枝杆菌感染筛查,运用焦磷酸测序技术则可快速准确地筛查出耐药样本,从痰液样本采集到结核分枝杆菌感染筛查以及药敏报告发布,全程仅需7 h;耐药菌株的检测可靠性达98%。

关键词(KeyWords): 荧光定量聚合酶链反应;焦磷酸测序;异烟肼;利福平;耐药性;结核分枝杆菌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): “艾滋病与病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2009ZX10004-006)

作者(Author): 程弘夏;柳建银;周立;王业富;唐景峰;

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