中国生物制品学杂志

2015, v.28(04) 352-355

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人重组催乳素蛋白的原核表达、纯化及其稳定性分析
Prokaryotic expression,purification and stability of recombinant human prolactin protein

刘晓磊;张慧丽;王俊山;韩静;常丽青;鲁琨;王战争;

摘要(Abstract):

目的表达并纯化重组人催乳素(prolactin,PRL)蛋白,并检测其抗原性及稳定性。方法以商品化的PRL c DNA为模板,PCR扩增目的基因,定向克隆至质粒p ET25中,构建重组原核表达质粒PRL-p ET25b,转化大肠埃希菌后诱导表达,产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定后,采用Bradford法测定蛋白浓度,PRL定量试剂盒分析抗原性,置-20、4和37℃9 d后,分析稳定性。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组PRL蛋白相对分子质量约30 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15%,纯度大于90%,总蛋白浓度为0.796 mg/ml。重组PRL蛋白于-20、4和37℃放置9 d,浓度变化较小,偏差在10%以内。结论获得了高纯度的重组PRL融合蛋白,抗原性及稳定性均较好,可应用于试剂盒标准品或校准品的制备。

关键词(KeyWords): PRL;原核细胞;基因表达;纯化;抗原性;稳定性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 刘晓磊;张慧丽;王俊山;韩静;常丽青;鲁琨;王战争;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000845

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