抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及应用
徐颖华,孟淑芳,张庶民,侯启明,雷殿良
摘要(Abstract):
目的制备抗百日咳丝状血凝素(FHA)的单克隆抗体,并建立特异、准确的FHA定量检测方法。方法采用杂交瘤技术制备McAb,以ELISA间接法筛选稳定分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,并进行系统的鉴定和纯化,建立定量检测FHA的ELISA方法。结果获得6株分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,抗体类别均为IgG1(κ),效价达1∶1051∶106,并能特异性识别FHA,与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应,应用ELISA检测FHA的灵敏度为1.04μg/L,批内变异系数为5.49%,批间变异系数为9.31%,平均回收率为94.18%。结论已成功制备了抗FHA-McA,建立了一种特异、准确地定量检测FHA的ELISA方法,可用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测,为该疫苗的质量控制提供了有力的手段。
关键词(KeyWords): 无细胞百日咳疫苗;丝状血凝素;单克隆抗体;ELISA
基金项目(Foundation):
作者(Author): 徐颖华,孟淑芳,张庶民,侯启明,雷殿良
DOI: 10.13200/j.cjb.2005.06.83.xuyh.029
参考文献(References):
- [1]Relman DA,Domenighini M,Tuomanen E,et al.Filamentous hemaggluti-nin of Bordetella pertusssis:nucleotide sequence and crucial role in ad-herence.Pcoc Natl Acad Sci USA,1989,86:2637-2641.
- [2]余志凯.实用单克隆抗体技术.西安:陕西科学技术出版社,1992.77~79.
- [3]Sato Y,Cowell L,James L,et al.Separation and pufication of the hemag-glutinins from bordetella pertussis.Infect Immun,1983,41(1):313-320.
- [4]Frigues B,Chaffotte AF,Djavadi-Ohaniame L,et al.Measurements of thetrue affinity constant in solution of antigen-abtibody complexes by enz-yme-linked immunosorbent assay.J Immun Mtd,1985,77:305-319.
- [5]李忠明,张延龄,徐德启,等.当代疫苗学.北京:高等教育出版社,2001.257~288.