中国生物制品学杂志

2007, (12) 913-916

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治疗性双质粒HBV DNA疫苗的纯化与检定
Purification and Quality Control of Two Recombinant Plasmids as Therapeutic HBV DNA Vaccine

饶桂荣;黄明;杨富强;莫国玉;刘惠萍;陈光明;

摘要(Abstract):

目的研究双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺,并建立质控标准。方法首先对两工程菌(DH5α/pS2.S和DH5α/pFP)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;然后通过三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)进行质粒纯化,并检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定。结果质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量的RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,最后经阴离子柱层析有效去除内毒素,并浓缩了质粒,质粒得率为0.9~1.1mg/g菌,质粒总回收率达78%。三批终产品全面质量检定均符合规定。结论建立了稳定的双质粒HBVDNA疫苗(pS2.S和pFP)的纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定基础。

关键词(KeyWords): 治疗性HBV DNA疫苗;质粒;纯化;质量控制

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家“863”课题基金资助项目(2002AA2Z3317).

作者(Author): 饶桂荣;黄明;杨富强;莫国玉;刘惠萍;陈光明;

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