中国生物制品学杂志

2020, v.33(03) 308-311+315

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重组人肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗外源DNA残留量检测方法的建立
Development of a method for determination of residual exogenous DNA in recombinant human enterovirus 71 virus-like particle vaccine

杨萍;张艳;李微;刘大维;闫慧;褚彦飞;白鹭;谷铁军;孙博;

摘要(Abstract):

目的建立重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中昆虫细胞宿主DNA残留的地高辛探针杂交检测方法。方法抽提昆虫细胞sf9基因组DNA,经分子筛纯化后作为阳性对照品;分别以1 000~5 000 bp和100~1 000 bp的基因组DNA超声随机小片段为模板,制备地高辛探针,与阳性对照进行杂交试验。同时验证方法的检测范围、灵敏度和特异性,并采用该方法对3批重组EV71 VLPs疫苗原液中宿主DNA残留量进行测定。结果纯化后DNA样品浓度为47. 5 ng/μL,A_(260)/A_(280)值为1. 86,可作为阳性对照。以100~1 000 bp DNA超声随机小片段作为模板,探针标记效率更高,杂交显色更清晰。该法检测范围为10 pg~10 ng,灵敏度达1 pg,特异性强。3批重组EV71 VLPs疫苗原液中每人份剂量的宿主细胞DNA残留均<50 pg。结论本实验建立的方法特异性强,灵敏度高,可用于重组EV71 VLPs疫苗制备过程中的原液检定及质量控制。

关键词(KeyWords): 地高辛探针杂交;DNA残留;昆虫细胞;重组人肠道病毒71型;病毒样颗粒

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 吉林省科技发展计划(20160209016YY)

作者(Author): 杨萍;张艳;李微;刘大维;闫慧;褚彦飞;白鹭;谷铁军;孙博;

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