中国生物制品学杂志

2012, v.25(12) 1684-1687

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狂犬病病毒抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用
Development and application of double antibody sandwich ELISA method for quantitative determination of rabies virus antigen

崔文广;杨屹;常军亮;井伟东;张秀霞;苗丽;丁丽丽;周长军;郭秀侠;

摘要(Abstract):

目的建立狂犬病病毒(Rabies virμs,RV)抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,以应用于疫苗生产过程中RV含量的监测。方法将RV aGV株纯化抗原经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,制备抗RV单克隆抗体,纯化后以HRP进行标记,建立双抗体夹心ELISA检测方法。以狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品为定量标准,建立剂量-反应曲线,确定该方法的灵敏度,并对该方法的专属性、精密性及适用性进行验证。结果制备了2株针对不同抗原位点的单克隆抗体1E9和2H1,间接ELISA法测定腹水效价为1∶105~1∶107,纯化后蛋白含量分别为10.285和7.64 mg/ml。建立的ELISA法对RV抗原的最低检出限为1.03 mIU/ml,标准曲线的最佳线性范围为1.03~66 mIU/ml,相关系数为0.991 9。该方法对检测过程中可能遇到的杂质和添加物(人血清白蛋白、牛血清、Vero细胞培养上清)的检测结果均为阴性;检测3个浓度(20、12.50和3.13 mIU/ml)狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品的试验内和试验间变异系数的平均值分别为7.78%和14.0%;用该方法检测不同毒株、不同细胞生产的狂犬病疫苗的RV抗原含量的平均值在0.67~4.86 IU/ml之间。结论成功建立了RV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,可对来自不同毒株、不同细胞的狂犬病疫苗的RV抗原进行快速定量检测,为疫苗生产中的质量控制提供了简便的监测手段。

关键词(KeyWords): 狂犬病病毒;抗原;定量检测;酶联免疫吸附测定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Authors): 崔文广;杨屹;常军亮;井伟东;张秀霞;苗丽;丁丽丽;周长军;郭秀侠;

DOI: 10.13200/j.cjb.2012.12.125.cuiwg.023

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