中国生物制品学杂志

2011, v.24(01) 83-87

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幽门螺杆菌HpaA蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用
Preparation and Preliminary Application of Monoclonal Antibody against Helicobacter pylori HpaA Protein

叶翠莲;姜和;蔡家利;邱容蓉;邹姝姝;王颖;

摘要(Abstract):

目的 制备幽门螺杆菌(H.pylori)HpaA蛋白单克隆抗体,并检测其对H.pylori黏附胃腺癌细胞AGS的抑制作用。方法应用PCR法扩增HpaA基因,构建重组表达质粒pQE30-HpaA,表达并纯化重组HpaA蛋白;以其为抗原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选阳性杂交瘤细胞株,采用间接ELISA和Western blot法检测单抗的特异性,间接ELISA检测细胞株培养上清和腹水抗体效价,并对其进行亚型鉴定和杂交瘤细胞株稳定性分析;扫描电镜观察重组HpaA蛋白单抗对H.pylori黏附AGS细胞的抑制作用。结果重组表达质粒pQE30-HpaA经双酶切、PCR及测序证明构建正确;表达的重组HpaA蛋白相对分子质量约为30 000,可溶性蛋白含量约占65%,纯化后纯度达85%以上;经细胞融合及筛选克隆获得了2株能稳定分泌抗HpaA单抗的杂交瘤细胞株,2株单抗与其他肠道细菌均无交叉反应,能与H.pylori全菌体发生特异性反应;乳胶凝集试验证明,该单抗属IgG3、κ型;2株单抗细胞培养液的抗体效价分别为1∶128~1∶256和1∶64~1∶128,腹水抗体效价分别可达1∶6 400~1∶12 800和1∶1 600~1∶3 200;杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代,仍能稳定分泌高效价抗体;单抗可抑制H.pylori对AGS细胞的黏附作用。结论已成功制备了H.pylori HpaA蛋白单克隆抗体,为建立新的H.pylori现症感染诊疗方法奠定了基础。

关键词(KeyWords): HpaA;螺杆菌,幽门;抗体,单克隆

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 重庆市科委自然科学基金项目(CSTC,2007BB5402);; 重庆理工大学科研基金资助项目(2006ZD35)

作者(Author): 叶翠莲;姜和;蔡家利;邱容蓉;邹姝姝;王颖;

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