蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒工艺的优化Optimization of procedure for purification of influenza virus by sucrose density gradient centrifugation
顾建阳;刘旭光;郭占龙;孙志伟;杜金东;徐文;孙宇;曹海丹;刘燕;曾亮;王思燕;王亚军;
摘要(Abstract):
目的优化蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的工艺参数。方法在不同进样量(600、700和800 ml)时,检测经蔗糖密度梯度离心纯化后各紫外检测峰的糖浓度、血凝滴度及卵清蛋白含量,并对血凝滴度大于1∶480的检测峰样品进行蛋白质含量和血凝素含量检测,确定最佳收峰位置、糖度范围及病毒浓缩液进样量;在不同比例的30%和50%的蔗糖溶液、不同离心时间(2、3和4 h)条件下对流感病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度离心纯化,检测纯化后的病毒纯化液蛋白质、血凝素及卵清蛋白含量,计算蛋白质含量与血凝素含量比值及血凝素回收率,确定最佳离心时间。结果确定最佳收峰位置为第三峰,糖度范围为30%50%之间;当病毒浓缩液进样量为60050%之间;当病毒浓缩液进样量为600700 ml时,30%蔗糖溶液进液量为450700 ml时,30%蔗糖溶液进液量为450550 ml,55%蔗糖溶液进液量为400550 ml,55%蔗糖溶液进液量为400500 ml,转速为90 639×g离心3 h后,可获得最佳纯化效果。结论确定了蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的最佳工艺参数,为进一步提高流感病毒的纯化效果提供了参考。
关键词(KeyWords): 流感病毒;蔗糖密度梯度离心;纯化
基金项目(Foundation): 国家科技重大专项(2012ZX09201301-006);; 吉林省医药产业发展专项资金(YYZX201112)
作者(Authors): 顾建阳;刘旭光;郭占龙;孙志伟;杜金东;徐文;孙宇;曹海丹;刘燕;曾亮;王思燕;王亚军;
DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001012
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