中国生物制品学杂志

2005, (04) 273-276

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中国人MBL基因编码区的克隆与原核表达
Cloning and Prokaryotic Expression of Encoding Region of Chinese MBL Gene

吴志聪,张庶民,王一飞,骆鹏,贾天军

摘要(Abstract):

目的克隆中国人MBL基因编码区序列,并在原核细胞中表达。方法提取肝总RNA,RT-PCR扩增MBL编码区序列,并克隆到pGEM-T-easy载体上,再亚克隆到pET-30(a)上。诱导表达重组MBL,并通过SDS-PAGE检测表达情况,表达蛋白经初步纯化后,用ELISA及点杂交试验检测其免疫原性。结果克隆得到长747bp的MBL编码区序列,与GenBank中的MBL序列同源性在99%以上。重组MBL相对分子质量约为36000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白量的20%左右,表达蛋白经初步纯化,纯度可达95%以上。ELISA检测显示重组MBLA490值与阴性对照差异有显著意义(10倍以上),点杂交检测结果为阳性。结论已成功克隆中国人MBL基因的编码区序列,并在大肠杆菌中表达,表达产物与天然MBL具有相似的免疫原性。

关键词(KeyWords): 甘露糖结合凝集素;基因克隆;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): “八六三”博士基金2003AA2Z3509;; 河北省自然科学基金300377

作者(Author): 吴志聪,张庶民,王一飞,骆鹏,贾天军

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