中国生物制品学杂志

2017, v.30(01) 25-28+33

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通过自诱导方法对乙型肝炎病毒聚合酶TP区进行可溶性表达及鉴定
Soluble expression of TP domain of hepatitis B virus polymerase by auto-induction and identification of expressed product

陈可;代娟;甘春扬;刘亚;罗英英;胡接力;蔡雪飞;

摘要(Abstract):

目的构建包含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)聚合酶TP区段的重组原核表达质粒,转化表达型大肠埃希菌,以自诱导培养方法获得可溶性表达,并对其进行鉴定。方法分析HBV(A型)聚合酶N-末端1-192 AA区域的DNA序列,通过网络工具(http://www.jcat.de/)在线优化,并在5′和3′端分别添加NdeⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点后,送英潍捷基(上海)贸易有限公司进行人工合成;将人工合成的TP-DNA双酶切后,插入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS进行自诱导表达。结果重组原核表达质粒pET32a(+)/POL-TP-Opt经双酶切及测序证明构建正确;在表达菌的破菌上清中有特异性表达的蛋白,相对分子质量约20 000,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,为可溶性的重组TP蛋白。结论通过自诱导培养方法,直接成功获得可溶性的重组TP蛋白,改变了长期以来依靠包涵体复性对TP蛋白相关功能进行研究的状况。

关键词(KeyWords): 自诱导;乙型肝炎病毒;聚合酶;TP区;原核细胞;基因表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 重庆市教委科学技术研究项目(KJ1500224);; 重庆市科委基础科学与前沿技术研究一般项目(cstc2016jcyj A0283)

作者(Author): 陈可;代娟;甘春扬;刘亚;罗英英;胡接力;蔡雪飞;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001607

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