中国生物制品学杂志

2015, v.28(04) 356-359+363

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钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白α、β亚基基因的克隆及其原核表达
Cloning and prokaryotic expression of allophycocyanin α and β subunit genes of Spirulina platensis

姜晓杰;高金亮;祁美荣;徐萌杰;王文杰;李炜;

摘要(Abstract):

目的克隆钝顶螺旋藻别藻蓝蛋白(allophycocyanin,APC)α、β亚基的基因序列,分别构建该蛋白的α和β亚基的原核表达载体,并在大肠埃希菌中进行表达。方法 PCR扩增钝顶螺旋藻APC基因(apc)序列,克隆至p GEM-T easy载体中,测序分析插入片段的正确性。以克隆的apc基因为模板,分别扩增APC的α和β亚基的编码基因apc A和apc B,测序分析正确后,分别克隆入表达载体p GEX-4T-1中,构建重组质粒p GEX-4T-apc A和p GEX-4T-apc B。将重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)p Lys S感受态细胞中,IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose TM 4Fast Flow树脂纯化,Bradford法测定纯化蛋白的浓度。结果成功克隆了钝顶螺旋藻的APCα和β亚基的编码基因apc A和apc B,构建的重组质粒经测序证明构建正确,表达的融合蛋白α-APC-GST和β-APC-GST的相对分子质量均为43 000,其中α-APC-GST主要以可溶性形式存在,表达量占菌体总蛋白的32.1%,纯化后的蛋白纯度达85%,蛋白浓度为0.3 mg/ml;β-APC-GST主要以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的31.4%,纯化后的蛋白纯度达65.4%,蛋白浓度为0.1 mg/ml。结论已成功克隆并在大肠埃希菌中表达了钝顶螺旋藻APC的α和β亚基。

关键词(KeyWords): 钝顶螺旋藻;别藻蓝蛋白亚基;基因;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 内蒙古自然科学基金(2013MS0521);; 内蒙古自治区应用技术与研究开发资金计划;; 鄂尔多斯市科技创新基金

作者(Author): 姜晓杰;高金亮;祁美荣;徐萌杰;王文杰;李炜;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000846

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