中国生物制品学杂志

2018, v.31(09) 955-959+964

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一种肺炎链球菌重组蛋白PsaA-PspA23原核表达载体的构建及表达
Construction and expression of a prokaryotic expression vector for recombinant protein PsaA-PspA23 of Streptococcus pneumoniae

甘忠桥;孟祥玉;李博;陈晓瑞;张悦;袁剑文;梁丹虹;吴永革;谷铁军;

摘要(Abstract):

目的优化肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23的同源区序列,阻止该基因的组氨酸标签(His-tag)融合表达,对突变后的目的基因进行表达及鉴定。方法以肺炎疫苗重组蛋白基因Psa A-Psp A23为模板,设计2对具有重叠区的特异性引物,并分别对该重组基因进行扩增,得到Psa A-Psp A2和Psp A3的CDR区(亚类决定区)基因片段。利用重叠延伸PCR(Overlap PCR)技术,将Psa A-Psp A2基因片段和Psp A3的CDR区基因片段连接,得到同源区优化后的基因片段。利用PCR技术扩增同源区优化后的基因片段,使该基因3′末端引入终止密码子,阻止Psa APsp A23基因表达载体上His-tag的融合表达。将得到的片段同源区优化且无His-tag融合表达的目的基因连接至p ET20b载体后,转入大肠埃希菌(E.coli)中进行表达,表达产物进行Western blot分析。结果重组表达质粒p ET20b-Psa A-Psp A23经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;转化E.coli中,37℃,IPTG终浓度1 mmol/L诱导5 h,获得可溶性表达的重组蛋白,且无His-tag。结论 Psa A-Psp A23蛋白基因同源区优化及His-tag成功去除,并在原核表达系统E.coli中可溶性表达,可为Psa A-Psp A23蛋白疫苗的进一步研究奠定基础。

关键词(KeyWords): 组氨酸标签;肺炎链球菌表面蛋白A;同源区序列;重叠延伸PCR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Authors): 甘忠桥;孟祥玉;李博;陈晓瑞;张悦;袁剑文;梁丹虹;吴永革;谷铁军;

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002276

参考文献(References):

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