中国生物制品学杂志

2010, v.23(07) 711-713

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大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株的构建与表达
Construction and Expression of Trp Operon Gene Mutant of E.coli

林维平;刘晓影;武敬亮;高志芹;孙同毅;

摘要(Abstract):

目的构建大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株,提高邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的产量。方法利用依赖于DpnⅠ酶的PCR方法突变表达载体pET-22b(+)-Trp Operon上的关键位点,PCR扩增Trp OperonM基因,构建pET-22b(+)-Trp OperonM重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。制备粗酶液,经比色法测定邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性。结果 PCR扩增产物可见约7000bp的Trp OperonM条带;所构建的重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确;邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性比大肠杆菌BL21(DE3)空菌分别提高了4.5倍和5.2倍。结论已成功构建了大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株BL21(DE3)/pET-22b(+)-Trp OperonM,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性均有提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础。

关键词(KeyWords): 色氨酸;操纵子;突变;邻氨基苯甲酸合成酶;色氨酸合成酶

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 潍坊医学院青年教师科研启动基金(690822289)

作者(Author): 林维平;刘晓影;武敬亮;高志芹;孙同毅;

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