中国生物制品学杂志

2011, v.24(12) 1391-1395+1399

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随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白的纯化及鉴定
Purification and Identification of Randomly Recombinant Multiepitope Protein M.RCAg-1 of Plasmodium falciparum Vaccine

王健;孙成金;李莉莉;陈祥鹏;李军;王恒;张振龙;

摘要(Abstract):

目的纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白,并进行各项鉴定。方法对BL21(DE3)-M.RCAg-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的M.RCAg-1蛋白进行各种理化性质鉴定;采用Western blot法检测其反应原性;以不同剂量的M.RCAg-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价;间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别;酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌;体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响。结果 M.RCAg-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30%,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95%左右,等电点为5.0;内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08%,N-末端氨基酸序列正确;可与相应鼠单抗特异性结合;免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1∶1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性;10、20和30μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖(P<0.01)及分泌IFNγ和IL-4(P<0.01),并能较好地抑制疟原虫体外生长。结论纯化的M.RCAg-1蛋白理化性质稳定,具有较强的免疫原性,能激发可持续、高滴度的特异性抗体,并能诱发显著的T细胞应答,是极具潜力的候选疫苗蛋白,具有较好的开发前景。

关键词(KeyWords): M.RCAg-1蛋白;多表位蛋白;疟疾疫苗

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 863计划“疫苗与抗体工程”重大专项(2006AA02A224);; “艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项(2008ZX10004-015)

作者(Author): 王健;孙成金;李莉莉;陈祥鹏;李军;王恒;张振龙;

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