中国生物制品学杂志

2021, v.34(08) 989-993+1001

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单核细胞增生性李斯特菌化学发光免疫检测法的建立及验证
Development and verification of chemiluminescence immunoassay for Listeria monocytogenes

栗克文;鲁倩茹;黄凤玲;邢珂慧;邵佩兰;

摘要(Abstract):

目的建立检测单核细胞增生性李斯特菌(简称单增李斯特菌)化学发光法并进行验证。方法以单增李斯特菌免疫原分别免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,制备鼠源单抗和兔血清多抗,建立检测单增李斯特菌化学发光免疫法,优化兔血清多抗包被浓度及单增李斯特菌反应时间,验证方法的检测范围、灵敏度、特异性、准确性及稳定性。结果制备的单增李斯特菌兔血清多抗及鼠源单抗效价分别为1∶256 000和1∶128 000。兔血清多抗最适包被浓度为0.05 mg/mL,与单增李斯特菌最适反应时间为40 min。该方法检测单增李斯特菌浓度范围为1×101~1×101~1×107CFU/m L,灵敏度小于10 CFU/mL;除单增李斯特菌ATCC19115外,单增李斯特菌CMCC54003、CMCC54004、英诺克李斯特菌也可检测到,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌,沙门菌未检出;添加1×107CFU/m L,灵敏度小于10 CFU/mL;除单增李斯特菌ATCC19115外,单增李斯特菌CMCC54003、CMCC54004、英诺克李斯特菌也可检测到,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌,沙门菌未检出;添加1×104CFU/mL单增李斯特菌的火腿肠、牛奶及冰激凌溶液中回收率分别为90.3%、101.6%和969.3%;包被好的化学发光板密闭封装37℃放置28 d后,单增李斯特菌发光值为初始包被值的75.3%。结论成功建立了检测单增李斯特菌化学发光法,该方法具有检测时间短、范围宽,特异性强等特性,为促进食品安全检测提供了参考依据。

关键词(KeyWords): 单核细胞增生性李斯特菌;化学发光免疫法;双抗体夹心ELISA法;食源性病原菌

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 石家庄市科学技术研究与发展计划项目(177460166A)

作者(Authors): 栗克文;鲁倩茹;黄凤玲;邢珂慧;邵佩兰;

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.003407

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